GCSFR Double Nickase Plasmid (h): sc-402269-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das G-CSFR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- G-CSFR Double-Nickase-Plasmid (h) und G-CSFR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CSF3R abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: G-CSFR: sc-514639
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GCSFR Double Nickase Plasmid (h) | sc-402269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
G-CSFR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSF3R kodiert den Rezeptor für den Granulozyten-Kolonie-stimulierenden Faktor (G-CSFR), einen Zytokinrezeptor vom Typ I, der die Bildung, Reifung und funktionelle Aktivierung von Neutrophilen in der myeloischen Linie reguliert. Nach Ligandenbindung signalisiert der G-CSFR vor allem über die JAK/STAT-, PI3K/AKT- und MAPK-Kaskaden, um Proliferation, Überleben, Differenzierung und Migration granulozytärer Vorläuferzellen zu steuern. Eine strenge Regulation der CSF3R-Signalübertragung ist für die hämatopoetische Homöostase essenziell, und eine veränderte Rezeptoraktivität wurde in verschiedenen Krankheitskontexten mit gestörter Myelopoese und leukämischer Transformation in Verbindung gebracht. Da CSF3R Zytokinsignale mit Transkriptionsprogrammen verknüpft, die die Granulopoese steuern, wird es häufig in Modellen zu Entzündung, Entwicklung der angeborenen Immunität und Mechanismen myeloischer Malignome untersucht.
G-CSFR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CSF3R-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CSF3R abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CSF3R-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CSF3R-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.