Plásmido Doble Nickase (h) GCS-β-1: sc-403225-NIC

GUCY1B3 codifica la subunidad β3 de la guanilato ciclasa soluble (sGC-β-1), un receptor clave del óxido nítrico que cataliza la conversión de GTP en cGMP. Este eje NO–sGC–cGMP regula la relajación del músculo liso vascular, la función plaquetaria y la neurotransmisión mediante efectores aguas abajo como la proteína quinasa dependiente de cGMP y las fosfodiesterasas, integrando señales que controlan el tono celular y la señalización sensible al estado redox. Las alteraciones en la señalización por cGMP y en la composición de subunidades de la sGC se han asociado con la biología cardiovascular y pulmonar, las respuestas inflamatorias y una hemostasia desregulada, lo que convierte a GUCY1B3 en una diana útil para estudios mecanísticos de la transducción de señales dependiente de NO. En modelos celulares humanos, la perturbación de GUCY1B3 puede ayudar a dilucidar cómo la actividad de la sGC contribuye a la dinámica del cGMP y a adaptaciones transcripcionales y metabólicas posteriores.

GCS-β-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GUCY1B3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GUCY1B3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GUCY1B3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GUCY1B3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.