GCNF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406967

Übersicht

NR6A1 kodiert den germ cell nuclear factor (GCNF), einen verwaisten nukleären Rezeptor, der während der Embryonalentwicklung und in der Keimzellbiologie hauptsächlich als Transkriptionsrepressor wirkt. GCNF trägt zur Festlegung von Zelllinien und zur Aufrechterhaltung von Differenzierungsprogrammen bei, indem es an Response-Elemente in Zielpromotoren bindet und Korepressor-Komplexe rekrutiert, die den Chromatinzustand verändern. In menschlichen Zellen überschneiden sich von NR6A1 regulierte Netzwerke mit Schaltkreisen für Pluripotenz und Differenzierung, einschließlich der Repression von Genen wie POU5F1/OCT4, was es mit der epigenetischen Kontrolle von Entwicklungsübergängen verknüpft. Eine fehlregulierte NR6A1-Aktivität wurde in Zusammenhängen untersucht, die abweichende Differenzierung und transkriptionelles Reprogramming betreffen, wodurch sie für Studien zu Entwicklungsstörungen und zur Plastizität von Tumorzellen relevant ist.

Das GCNF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NR6A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NR6A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NR6A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GCNF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NR6A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GCNF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NR6A1-Exone abzielen, die für die GCNF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NR6A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GCNF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GCNF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NR6A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GCNF HDR-Plasmid (h) und GCNF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NR6A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NR6A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.