Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) GCN5: sc-420512-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)GCN5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GCN5 (m) y el plásmido de doble nickasa GCN5 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Kat2a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GCN5 Anticuerpo (A-11): sc-365321
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) GCN5 | sc-420512-NIC | 20 µg | $410.00 |
Kat2a codifica GCN5, una acetiltransferasa de lisina que deposita marcas de acetilación de histonas como H3K9ac y H3K14ac para promover una cromatina abierta y la activación transcripcional. En células de ratón, GCN5 funciona dentro de complejos coactivadores tipo SAGA y ATAC, coordinando la transcripción mediada por la ARN polimerasa II con la remodelación de la cromatina durante la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y los programas de diferenciación. La actividad de Kat2a/GCN5 se entrecruza con redes reguladoras de genes del desarrollo y de la hematopoyesis, e influye en vías vinculadas al control del destino celular. La acetilación de la cromatina desregulada en la que participa GCN5 se ha asociado con fenotipos proliferativos y estados transcripcionales alterados relevantes para el cáncer y la neurobiología del desarrollo, lo que respalda estudios mecanísticos en regulación epigenética.
GCN5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Kat2a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Kat2a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Kat2a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Kat2a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.