Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCM1: sc-403269-ACT

Le GCM1 humain (glial cells missing homolog 1) est un facteur de transcription à restriction de lignée qui joue un rôle central dans la différenciation des trophoblastes et le développement placentaire, notamment la formation du syncytiotrophoblaste et la régulation de gènes impliqués dans la production hormonale, la fusion cellulaire et les échanges nutritifs. En se liant à des éléments promoteurs/activateurs (enhancers) spécifiques, GCM1 intègre les signaux du développement à des programmes transcriptionnels qui contrôlent l’engagement du destin cellulaire, l’invasion et le remodelage vasculaire à l’interface materno-fœtale. Une expression ou une activité altérée de GCM1 a été associée à des phénotypes de dysfonction placentaire et à une biologie de la grossesse défavorable, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des voies impliquées dans une maturation trophoblastique déficiente et l’insuffisance placentaire. Son réseau en aval recoupe des circuits transcriptionnels sensibles au stress, à l’hypoxie et aux facteurs de croissance, qui peuvent être modélisés dans des cellules souches trophoblastiques, des organoïdes placentaires et des contextes épithéliaux apparentés.

GCM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GCM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GCM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GCM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GCM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GCM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.