Plásmido Doble Nickase (h) GCK: sc-400852-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GCK consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GCK (h) y el plásmido de doble nickasa GCK (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GCK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GCK Anticuerpo (G-6): sc-17819
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GCK | sc-400852-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GCK | sc-400852-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La glucocinasa (GCK) codifica la enzima hexocinasa IV, que fosforila la glucosa a glucosa-6-fosfato y actúa como un sensor clave de glucosa que acopla la disponibilidad extracelular de glucosa al metabolismo celular. En las células β pancreáticas, la actividad de GCK ayuda a establecer el umbral para la secreción de insulina estimulada por glucosa, mientras que en los hepatocitos sostiene el flujo glucolítico y la síntesis de glucógeno mediante su integración con la glucólisis, la regulación de la gluconeogénesis y programas metabólicos sensibles a los carbohidratos. Al controlar la entrada de glucosa en el metabolismo central del carbono, GCK influye en el equilibrio ATP/ADP, la señalización por metabolitos y las vías posteriores vinculadas a la secreción de insulina y a la utilización hepática de glucosa. Las alteraciones genéticas y funcionales de GCK se asocian de manera estrecha con cambios en la homeostasis de la glucosa y con formas monogénicas de disglucemia, lo que la convierte en una diana ampliamente utilizada para estudios mecanísticos de la regulación metabólica.
GCK El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GCK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GCK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GCK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GCK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.