Plasmide Double Nickase (h) GC-1: sc-403599-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GC-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GC-1 Double Nickase (h) et le plasmide GC-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant OLFM4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GC-1 | sc-403599-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GC-1 | sc-403599-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OLFM4 (olfactomédine 4) code une glycoprotéine sécrétée impliquée dans la biologie des lignages épithéliaux et la régulation de l’immunité innée, avec une expression marquée dans les cellules de la base des cryptes gastro-intestinales et dans certains sous-ensembles de neutrophiles. OLFM4 a été associé au contrôle de l’adhésion cellulaire, de la différenciation et des réponses au stress, et il est fréquemment utilisé comme marqueur d’états de type « cellule souche » dans les tissus muqueux. Dans les contextes de signalisation, OLFM4 est souvent étudié en parallèle des programmes associés à la voie Wnt/β-caténine, qui gouvernent le renouvellement épithélial et l’homéostasie de la barrière. Des profils d’expression altérés d’OLFM4 ont été rapportés dans diverses affections inflammatoires et de nombreux types tumoraux, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques portant sur les signaux du microenvironnement et la plasticité des lignages.
GC-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus OLFM4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de OLFM4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de OLFM4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de OLFM4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.