Plásmido CRISPR de Activación (m) GBX2: sc-420503-ACT

El gen murino **Gbx2** codifica el factor de transcripción homeobox **GBX2**, un regulador clave del patrón embrionario y de la identidad regional en el sistema nervioso central en desarrollo. GBX2 participa en programas transcripcionales que coordinan el desarrollo del tubo neural y del rombencéfalo, interactuando con redes impulsadas por morfógenos como las vías de señalización **WNT**, **FGF** y del **ácido retinoico** para establecer límites antero–posteriores y la especificación de linajes neuronales. La alteración de la regulación génica dependiente de GBX2 es relevante en estudios de desregulación del neurodesarrollo y malformaciones congénitas, donde los cambios en la formación de fronteras y en las decisiones de destino celular pueden tener consecuencias fenotípicas duraderas. En contextos adultos y de células madre/progenitoras, GBX2 se utiliza como marcador y como nodo mecanístico para investigar trayectorias de diferenciación y jerarquías de factores de transcripción.

GBX2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gbx2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GBX2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gbx2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gbx2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GBX2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gbx2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GBX2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GBX2 en células tumorales con expresión de Gbx2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.