Plasmide Double Nickase (h) GBP1: sc-401778-NIC

La GBP1 humaine (guanylate-binding protein 1) est une grande GTPase inductible par les interférons, qui se localise aux membranes intracellulaires et aux vacuoles contenant des agents pathogènes, où elle contribue à l’immunité cellulaire autonome. GBP1 participe à des programmes induits par l’IFN-γ, à la signalisation de l’immunité innée et à la restriction antimicrobienne via une oligomérisation dépendante du GTP et le recrutement de mécanismes effecteurs en aval. Son activité recoupe des voies qui contrôlent la régulation de l’inflammasome, les réponses cytokiniques et la défense de la barrière épithéliale, ce qui fait de GBP1 un nœud pertinent pour étudier les interactions hôte–pathogène et l’architecture des réseaux inflammatoires. Des signatures d’interféron/GBP1 dérégulées ont été rapportées dans de multiples contextes de maladies inflammatoires et infectieuses, et sont fréquemment observées dans les microenvironnements tumoraux, soutenant les recherches sur les réponses au stress médiées par l’immunité et l’inflammation associée au cancer.

GBP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GBP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GBP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GBP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.