Plasmide CRISPR d'Activation (m) GBE1: sc-428773-ACT

Le gène murin **Gbe1** code l’enzyme de branchement du glycogène 1 (**GBE1**), une glycosyltransférase clé qui introduit des points de branchement **α‑1,6** lors de la biosynthèse du glycogène. En contrôlant l’architecture du glycogène, GBE1 favorise un stockage normal du glucose, la solubilité du glycogène et une mobilisation efficace dans les tissus à forte activité métabolique, en s’inscrivant au carrefour des voies centrales du métabolisme des glucides et de l’homéostasie énergétique. Une perturbation du branchement du glycogène modifie la structure des particules de glycogène et peut favoriser l’accumulation de polysaccharides peu branchés, de type amylopectine, faisant de **Gbe1** un nœud pertinent pour étudier le contrôle qualité du glycogène et les réponses au stress métabolique. Une activité GBE1 dérégulée est associée, dans des systèmes modèles, à des pathologies de stockage du glycogène et à des phénotypes neuromusculaires, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la biologie des maladies liées au métabolisme du glycogène.

GBE1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gbe1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GBE1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gbe1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gbe1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GBE1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gbe1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GBE1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GBE1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gbe1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.