Plasmide Double Nickase (h) GATA4: sc-400122-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GATA4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GATA4 Double Nickase (h) et le plasmide GATA4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GATA4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GATA4 Antibody (G-4): sc-25310
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GATA4 | sc-400122-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GATA4 | sc-400122-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GATA4 code un facteur de transcription à doigt de zinc qui se lie aux motifs GATA afin de réguler des programmes géniques contrôlant la morphogenèse cardiaque, la différenciation des cardiomyocytes et le développement d’organes dérivés de l’endoderme. En concertation avec des cofacteurs tels que NKX2-5, TBX5 et des protéines de la famille FOG, GATA4 intègre des signaux provenant notamment des voies BMP, WNT et MAPK pour coordonner la spécification des lignages et le remodelage tissulaire. Des modifications de la dose ou de la séquence de GATA4 peuvent perturber les réseaux transcriptionnels qui gouvernent le développement du cœur et du tractus gastro-intestinal, et un dérèglement de l’activité des enhancers dépendants de GATA4 a été associé à des cardiopathies congénitales ainsi qu’à des changements d’expression génique liés à la cardiomyopathie. En tant que régulateur nodal de la transcription associée à la chromatine, GATA4 est largement utilisé pour étudier les circuits de régulation génique du développement et le contrôle du destin cellulaire.
GATA4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GATA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GATA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GATA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GATA4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.