GATA-6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400724-ACT

GATA6 kodiert GATA-6, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GATA-Motive bindet und so die Festlegung von Zelllinien sowie Differenzierungsprogramme während der Endoderm- und kardiovaskulären Entwicklung steuert. In humanen Zellen reguliert GATA-6 transkriptionelle Netzwerke, die die Reifung von Epithelzellen, die Expression glatter-Muskel-Gene und die Organogenese kontrollieren, mit nachgeschalteten Effekten auf Zellzykluskontrolle, Stoffwechsel und Stressantwort-Signalwege. Eine fehlregulierte GATA6-Aktivität oder Veränderungen der Kopienzahl wurden mit Entwicklungsdefekten sowie mit krankheitsrelevantem Umbau der Genexpression in onkologischen und kardiometabolischen Kontexten in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen GATA-6 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um in mechanistischen Studien transkriptionelle Schaltkreise, Enhancer-Nutzung und Zellschicksalsübergänge zu untersuchen.

GATA-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GATA6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GATA-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GATA6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GATA6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GATA-6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GATA6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GATA-6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GATA-6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GATA6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.