Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
GAP-43 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400632
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GAP-43 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GAP-43, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GAP-43 Anticuerpo (B-5): sc-17790
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GAP-43 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400632 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
GAP43 codifica la proteína asociada al crecimiento 43 (GAP-43), una fosfoproteína asociada a la membrana enriquecida en conos de crecimiento neuronales y terminales presinápticas, que favorece el crecimiento y la guía axonal, así como la remodelación sináptica. GAP-43 interactúa con la calmodulina y es un sustrato destacado de la PKC, lo que vincula la señalización por calcio y el control dependiente de la fosforilación de la dinámica del citoesqueleto y del tráfico vesicular. Debido a sus funciones en la extensión de neuritas y en programas transcripcionales relacionados con la plasticidad, GAP-43 se utiliza ampliamente como marcador de estados regenerativos y del desarrollo en el sistema nervioso. La expresión y fosforilación alteradas de GAP-43 se han investigado en el contexto de procesos del neurodesarrollo y neurodegenerativos en los que se ven afectadas la conectividad sináptica y el mantenimiento axonal.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GAP43 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GAP43 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GAP43 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GAP-43.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GAP43 para la investigación de la señalización de GAP-43, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GAP43 críticos para la función de GAP-43
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GAP43 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GAP-43 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GAP-43 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GAP43. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GAP-43 (h) y el plásmido HDR GAP-43 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GAP43 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GAP43 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.