Plásmido CRISPR de Activación (h) Ganglioside sialidase: sc-404848-ACT

NEU3 codifica una sialidasa de gangliósidos humana asociada a la membrana plasmática, que elimina los ácidos siálicos terminales de los gangliósidos y de glicoesfingolípidos relacionados, remodelando la composición de los glicanos en la superficie celular. Al modular microdominios de membrana dependientes de gangliósidos, NEU3 puede influir en la señalización de receptores tirosina cinasa, en la adhesión y migración celular, y en vías posteriores vinculadas a MAPK/PI3K que responden a cambios en la organización lípido–proteína. Una actividad de sialidasa alterada afecta el metabolismo de los glicoesfingolípidos y las redes de señalización inflamatoria, lo que convierte a NEU3 en un nodo útil para estudiar cómo la remodelación de glicanos regula la comunicación celular. Se ha informado de una expresión desregulada de NEU3 en contextos de crecimiento anómalo y remodelación tisular, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la señalización asociada a enfermedades y de la biología de membranas.

Ganglioside sialidase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NEU3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ganglioside sialidase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NEU3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NEU3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ganglioside sialidase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NEU3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ganglioside sialidase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ganglioside sialidase en células tumorales con expresión de NEU3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.