GALR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404381-ACT

GALR1 codifica o receptor humano de galanina 1, um receptor acoplado à proteína G do tipo rodopsina que se liga ao neuropeptídeo galanina e transduz sinais principalmente via Gi/o para inibir a adenilil ciclase e modular a atividade a jusante de cAMP/PKA. A ativação do receptor influencia a excitabilidade neuronal, a transmissão sináptica e a secreção neuroendócrina, com efeitos adicionais na sinalização por MAPK e na dinâmica do cálcio intracelular, dependendo do contexto celular. O GALR1 contribui para a regulação do apetite, da nocicepção, de comportamentos relacionados ao humor e da função autonômica, e alterações na sinalização galanina–GALR1 têm sido implicadas em fenótipos neurológicos e psiquiátricos. Na biologia do câncer, foram relatadas expressão diferencial de GALR1 e reprogramação das vias de GPCR em vários contextos tumorais, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico para estudos de sinalização e transcrição.

GALR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GALR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GALR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GALR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GALR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GALR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GALR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GALR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GALR1 em células tumorais com expressão de GALR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.