GALR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404381-ACT

GALR1 kodiert den humanen Galaninrezeptor 1, einen rhodopsinähnlichen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der das Neuropeptid Galanin bindet und Signale vor allem über Gi/o weiterleitet, um die Adenylylcyclase zu hemmen und die nachgeschaltete cAMP/PKA‑Aktivität zu modulieren. Die Rezeptoraktivierung beeinflusst die neuronale Erregbarkeit, die synaptische Transmission und die neuroendokrine Sekretion; je nach zellulärem Kontext kommen zusätzliche Effekte auf die MAPK‑Signalübertragung und die intrazelluläre Calciumdynamik hinzu. GALR1 trägt zur Regulation von Appetit, Nozizeption, stimmungsbezogenen Verhaltensweisen und autonomen Funktionen bei, und eine veränderte Galanin‑GALR1‑Signalgebung wurde mit neurologischen und psychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht. In der Krebsbiologie wurden in mehreren Tumorkontexten eine differenzielle GALR1‑Expression sowie ein Rewiring von GPCR‑Signalwegen beschrieben, was GALR1 als nützlichen mechanistischen Knotenpunkt für Signal- und Transkriptionsstudien nahelegt.

GALR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GALR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GALR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GALR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GALR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GALR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GALR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GALR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GALR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GALR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.