G3BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424175

Übersicht

G3bp1 kodiert G3BP1, ein RNA-bindendes Protein, das die Bildung von Stressgranula initiiert und während zellulären Stresses die „Triage“ von mRNAs koordiniert. Über Interaktionen mit Translationsinitiationsfaktoren und Signalproteinen verknüpft G3BP1 Stressantworten mit Signalwegen, die die mRNA-Stabilität, die angeborene Immunantwort und Apoptose regulieren, einschließlich Wechselwirkungen mit MAPK- und interferonassoziierten Programmen. In Mausmodellen wird G3BP1 häufig hinsichtlich seiner Funktionen bei der antiviralen Restriktion und der Modulation entzündlicher Signalwege untersucht, ebenso wie wegen seiner breiteren Auswirkungen auf Proteostase und Entscheidungen über das Zellschicksal. Eine fehlregulierte Stressgranula-Dynamik unter Beteiligung von G3BP1 wurde in experimentellen Modellen mit neurodegenerativen und krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Erforschung von Krankheitsmechanismen unterstreicht.

Das G3BP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des G3bp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des G3bp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von G3bp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die G3BP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von G3bp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der G3BP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf G3bp1-Exone abzielen, die für die G3BP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere G3bp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom G3BP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom G3BP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des G3bp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das G3BP1 HDR-Plasmid (m) und G3BP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von G3bp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten G3bp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.