Plasmide CRISPR/Cas9 KO FXR1 (m): sc-420430

Présentation

Fxr1 code la protéine 1 apparentée au syndrome de l’X fragile avec retard mental (FXR1), une protéine liant l’ARN qui régule l’expression génique post‑transcriptionnelle en contrôlant la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. FXR1 s’associe à des granules ribonucléoprotéiques et participe à des programmes de métabolisme de l’ARN qui façonnent la croissance cellulaire, la différenciation et les réponses au stress, notamment via la modulation de transcrits liés au cytosquelette et au muscle. Chez la souris, Fxr1 contribue à l’expression génique spécifique des tissus et à des processus du développement nécessitant un contrôle translationnel strict. Dans la littérature, la dérégulation des réseaux d’ARN dépendants de FXR1 a été associée à une altération des voies de signalisation de la prolifération et de la survie, ainsi qu’à des phénotypes pertinents pour la neurobiologie du développement et la biologie neuromusculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FXR1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fxr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fxr1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fxr1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FXR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fxr1 pour l'étude de la signalisation de FXR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fxr1 essentiels à la fonction de FXR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fxr1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FXR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FXR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fxr1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FXR1 plasmide HDR (m) et le FXR1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fxr1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fxr1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.