Plasmide CRISPR d'Activation (h) FXR1: sc-402570-ACT

FXR1 (fragile X mental retardation syndrome-related protein 1) est une protéine liant l’ARN qui régule l’expression génique post‑transcriptionnelle en contrôlant la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. Elle s’associe à des complexes ribonucléoprotéiques et à des granules de stress, intégrant les signaux de signalisation au métabolisme de l’ARN afin de façonner la production protéique lors de la prolifération, de la différenciation et des réponses au stress. FXR1 contribue à l’organisation du cytosquelette et au contrôle du cycle cellulaire en modulant la traduction de transcrits pertinents pour différentes voies, reliant ainsi la régulation de l’ARN à des processus tels que la migration et la survie. Une expression ou une activité altérée de FXR1 a été impliquée dans des contextes de biologie tumorale ainsi que dans des phénotypes neuromusculaires et neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux de régulation de l’ARN.

FXR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FXR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FXR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FXR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FXR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FXR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FXR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FXR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FXR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FXR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.