Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Furin Double Nickase Plasmid (m): sc-422141-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Furin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Furin Double-Nickase-Plasmid (m) und Furin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Furin abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Furin: sc-133142
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Furin Double Nickase Plasmid (m) | sc-422141-NIC | 20 µg | $410.00 |
Furin (PCSK3) ist eine calciumabhängige Proprotein-Konvertase, die im sekretorischen Weg – einschließlich des Trans-Golgi-Netzwerks und endosomaler Kompartimente – Vorläuferproteine in reife, bioaktive Formen umwandelt. Durch die Spaltung von Substraten mit basischen Motiven reguliert es die Reifung von Hormonen, Wachstumsfaktoren, Rezeptoren und Metalloproteinasen und beeinflusst damit Signalkaskaden wie TGF-β/BMP, Notch sowie den Umbau der extrazellulären Matrix. In Mausmodellen prägt die Furin-Aktivität Entwicklungsprozesse, Immun- und Entzündungsreaktionen sowie die Zell-Zell-Kommunikation durch kontrollierte Proteolyse membranständiger und sekretierter Proteine. Eine fehlregulierte, furinabhängige Prozessierung wurde in der Literatur mit veränderter Gewebehomöostase und Pathophysiologie in Verbindung gebracht, was Furin als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur proteasegetriebenen Signalübertragung und Proteostase unterstützt.
Furin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Furin-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Furin abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Furin-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Furin-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.