Plasmide Double Nickase (h) Fumarylacetoacetase: sc-402478-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Fumarylacetoacetase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Fumarylacetoacetase Double Nickase (h) et le plasmide Fumarylacetoacetase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FAH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Fumarylacetoacetase | sc-402478-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Fumarylacetoacetase | sc-402478-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAH code la fumarylacétoacétase, une enzyme cytosolique qui catalyse l’étape terminale du catabolisme de la tyrosine en convertissant la fumarylacétoacétate en fumarate et en acétoacétate, reliant ainsi la dégradation des acides aminés au métabolisme central du carbone. En empêchant l’accumulation d’intermédiaires réactifs tels que la fumarylacétoacétate et le succinylacétone, FAH contribue à l’homéostasie rédox et limite les dommages aux protéines et à l’ADN dans les hépatocytes. La perturbation de FAH altère le flux de dégradation de la tyrosine et les voies de signalisation métabolique en aval, offrant un modèle accessible pour l’étude des réponses au stress métabolique. Une déficience génétique en FAH est associée à la tyrosinémie héréditaire de type I, un trouble métabolique principalement hépatique largement utilisé dans les systèmes expérimentaux pour étudier la biologie des métabolites hépatotoxiques.
Fumarylacetoacetase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FAH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FAH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FAH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FAH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.