Plasmide CRISPR d'Activation (h) FucT-IX: sc-416354-ACT

FUT9 code l’α1,3‑fucosyltransférase IX (FucT‑IX), une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse les étapes terminales de fucosylation lors de la biosynthèse d’antigènes de type Lewis, notamment Lewis X (CD15). En façonnant les structures glycanes de surface et sécrétées, FucT‑IX influence des événements de reconnaissance dépendants des glycannes impliqués dans l’adhésion cellulaire, la migration et les interactions des cellules immunitaires. L’activité de FUT9 s’inscrit dans des réseaux plus larges de glycosylation qui modulent la signalisation des récepteurs, les programmes de développement et la différenciation spécifique de lignée, en particulier dans les contextes neural et hématopoïétique. Des altérations des profils de fucosylation et une dysrégulation de FUT9 ont été associées à des changements du comportement des cellules tumorales et des microenvironnements inflammatoires, faisant de FUT9 une cible utile pour des études mécanistiques des glyco‑épitopes en biologie des maladies.

FucT-IX Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FUT9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FucT-IX Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FUT9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FUT9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FucT-IX. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FUT9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FucT-IX au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FucT-IX dans les cellules tumorales présentant une expression de FUT9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.