Plásmido CRISPR de Activación (h) FucT-III/V/VI: sc-401521-ACT

FUT3 codifica una α(1,3/1,4)-fucosiltransferasa (familia FucT-III/V/VI) que cataliza la fucosilación terminal de glicanos para generar antígenos Lewis en glicoproteínas y glicolípidos. Esta enzima actúa dentro de las redes de glicosilación del aparato de Golgi que configuran las estructuras de carbohidratos de la superficie celular, influyendo en la adhesión mediada por lectinas, la señalización de receptores y la biología de las mucinas. Los epítopos glucídicos impulsados por FUT3 contribuyen al paisaje molecular de la diferenciación epitelial y a las interacciones huésped–microbio en superficies mucosas. La alteración de la actividad de FUT3 y de la expresión de antígenos Lewis se ha asociado con variaciones en fenotipos inflamatorios y con patrones de glicosilación vinculados al cáncer, lo que respalda su uso como un nodo funcional en investigaciones de glicómica y adhesión celular.

FucT-III/V/VI El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FUT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FucT-III/V/VI El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FUT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FUT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FucT-III/V/VI. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FUT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FucT-III/V/VI en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FucT-III/V/VI en células tumorales con expresión de FUT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.