FUCA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405221

Übersicht

FUCA2 kodiert für Alpha-L-Fucosidase 2, eine sekretierte Glycosidase vom lysosomalen Typ, die terminale Fucose-Reste von N- und O-glykosylierten Glykokonjugaten sowie Glykolipiden abspaltet und damit zum Abbau und zur Umgestaltung von Glykanen beiträgt. Durch die Modulation des Fucosylierungsstatus von Zelloberflächen- und extrazellulären Matrixproteinen kann FUCA2 Prozesse wie Rezeptorumsatz, Zell-Zell-Adhäsion und immunassoziierte glykanbasierte Signalgebung beeinflussen. Veränderungen im Fucosestoffwechsel und in der Fucosidase-Aktivität wurden mit Änderungen entzündlicher Reaktionen und tumorspezifischer Glykosylierungsmuster in Verbindung gebracht, was FUCA2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung glykomikgetriebener Phänotypen macht. Funktionelle Studien konzentrieren sich häufig darauf, wie sich eine FUCA2-abhängige Defucosylierung auf Trafficking, lysosomale Funktionen und glycoproteinvermittelte Signalwege auswirkt.

Das FUCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FUCA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FUCA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FUCA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FUCA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FUCA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FUCA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FUCA2-Exone abzielen, die für die FUCA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FUCA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FUCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FUCA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FUCA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FUCA2 HDR-Plasmid (h) und FUCA2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FUCA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FUCA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.