Plasmide CRISPR/Cas9 KO FTS (m): sc-420422
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- FTS Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique FTS, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FTS Antibody (KK-L5): sc-134343
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO FTS (m) | sc-420422 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin Aktip code la protéine FTS, un composant de la machinerie de régulation des télomères qui s’associe aux facteurs du complexe shelterin et contribue au maintien de l’intégrité télomérique. FTS a été impliquée dans le contrôle de l’accès de la télomérase, l’homéostasie de la longueur des télomères et la protection des extrémités chromosomiques, influençant ainsi la stabilité du génome et la capacité proliférative. Par ces fonctions, Aktip/FTS se situe à l’interface de la réponse aux dommages de l’ADN et des voies de signalisation des points de contrôle du cycle cellulaire, des processus fréquemment altérés dans les phénotypes d’instabilité chromosomique et les modèles pertinents pour le cancer. L’analyse de la fonction de FTS est également instructive pour les études sur l’autorénouvellement des cellules souches, le stress réplicatif et la dysfonction télomérique associée au vieillissement dans des systèmes murins.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FTS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aktip dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aktip, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aktip à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FTS.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aktip pour l'étude de la signalisation de FTS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Aktip essentiels à la fonction de FTS
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aktip pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le FTS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FTS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aktip. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le FTS plasmide HDR (m) et le FTS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aktip pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aktip définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.