Plasmide CRISPR/Cas9 KO FTCD (m): sc-420419

Présentation

Le gène murin *Ftcd* code la formiminotransférase cyclodéaminase (FTCD), une enzyme cytosolique bifonctionnelle qui catalyse des étapes successives du catabolisme de l’histidine et relie le métabolisme à un carbone aux voies dépendantes du folate. L’activité de FTCD contribue aux réserves cellulaires de dérivés du tétrahydrofolate, qui soutiennent la biosynthèse des nucléotides et les réactions de méthylation, reliant l’utilisation des acides aminés à l’homéostasie métabolique. Une altération de la fonction de FTCD est associée à des erreurs innées du métabolisme affectant la prise en charge du formiminoglutamate, ainsi qu’à des perturbations plus larges des flux du métabolisme à un carbone, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réponses au stress métabolique. *Ftcd* est également utilisé comme marqueur associé aux hépatocytes dans les modèles murins, ce qui soutient la recherche sur le métabolisme hépatique et l’état de différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FTCD (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ftcd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ftcd, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ftcd à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FTCD.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ftcd pour l'étude de la signalisation de FTCD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ftcd essentiels à la fonction de FTCD
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ftcd pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FTCD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FTCD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ftcd. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FTCD plasmide HDR (m) et le FTCD (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ftcd pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ftcd définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.