Plasmide Double Nickase (h) FTβ: sc-403479-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FTβ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FTβ Double Nickase (h) et le plasmide FTβ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FNTB. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FTβ Antibody (B-7): sc-46664
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FTβ | sc-403479-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FTβ | sc-403479-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FNTB code la sous-unité β de la farnésyltransférase des protéines (FTβ), une enzyme clé de la voie de prénylation qui catalyse le transfert d’un groupement farnésyle sur les protéines portant un motif CAAX en C‑terminal. Cette modification lipidique favorise l’association aux membranes, la stabilité des protéines et leur trafic subcellulaire pour de nombreuses protéines de signalisation, influençant ainsi des voies qui contrôlent la prolifération, la différenciation et le transport vésiculaire. La farnésylation dépendante de FTβ est étroitement liée aux réseaux de transduction du signal pilotés par de petites GTPases et à la régulation du cytosquelette. Des dynamiques de prénylation dérégulées et une dépendance modifiée à l’activité de la farnésyltransférase ont été associées à des contextes de signalisation oncogénique ainsi qu’à d’autres troubles impliquant des complexes de signalisation anormaux localisés à la membrane.
FTβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FNTB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FNTB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FNTB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FNTB.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.