Plasmide Double Nickase (h) FRP-3: sc-402504-NIC

Le gène humain **FRZB** code la protéine apparentée à Frizzled 3 (**FRP-3**), un antagoniste sécrété de la voie Wnt qui se lie aux ligands Wnt et module leur interaction avec les récepteurs Frizzled afin d’ajuster la transcription dépendante de la **β-caténine**. En limitant la signalisation Wnt canonique, FRP-3 influence les décisions de destinée cellulaire, le remodelage de la matrice extracellulaire et les programmes de différenciation dans les tissus mésenchymateux et squelettiques. Des altérations de l’activité de FRZB ont été associées à une dérégulation des sorties de la voie Wnt pertinente pour l’homéostasie du cartilage et la dégénérescence ostéo-articulaire, et FRZB est fréquemment étudié comme un régulateur dépendant du contexte de la signalisation associée aux tumeurs. La perturbation de FRZB est donc utile pour étudier le contrôle des gradients Wnt, les interactions entre voies de signalisation et les réseaux transcriptionnels qui régissent la prolifération et la différenciation.

FRP-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FRZB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FRZB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FRZB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FRZB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.