Plásmido CRISPR de Activación (h) Frataxin: sc-401628-ACT

FXN codifica la proteína mitocondrial humana frataxina, un regulador central de la biogénesis de los clústeres hierro‑azufre (Fe–S) que sustenta la fosforilación oxidativa, la función de enzimas del ciclo del TCA y la homeostasis redox. La frataxina participa en el manejo del hierro mitocondrial y coordina el ensamblaje de cofactores Fe–S necesarios para el transporte de electrones y múltiples enzimas metabólicas. La reducción de la expresión de FXN se asocia con disfunción mitocondrial, estrés oxidativo y alteraciones del metabolismo del hierro, lo que vincula esta vía con la neurodegeneración y fenotipos cardiometabólicos. Por ello, FXN se estudia ampliamente en modelos que investigan el control de calidad mitocondrial, la remodelación bioenergética y la señalización de respuesta al estrés.

Frataxin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FXN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Frataxin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FXN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FXN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Frataxin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FXN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Frataxin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Frataxin en células tumorales con expresión de FXN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.