FOXM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416676-ACT

FOXM1 (forkhead box M1) é um fator de transcrição associado à proliferação que coordena a progressão do ciclo celular ao regular genes necessários para a transição G1/S e para a entrada em mitose, incluindo vias que controlam a replicação do DNA, a montagem do fuso mitótico e a segregação dos cromossomos. Ele interage com redes regulatórias centrais, como a sinalização CDK–ciclina e programas de resposta a danos no DNA, para equilibrar a divisão celular com a integridade do genoma. A expressão aberrante de FOXM1 é frequentemente observada em assinaturas transcricionais relacionadas à oncologia e está ligada ao crescimento invasivo, à instabilidade genômica e a respostas celulares alteradas ao estresse, tornando-o um alvo amplamente utilizado para estudar biologia tumoral e controle do ciclo celular. Além disso, FOXM1 contribui para programas de remodelamento tecidual ao influenciar características epiteliais–mesenquimais e respostas transcricionais ao estresse oxidativo e replicativo.

FOXM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXM1 em células tumorais com expressão de FOXM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.