FOXL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403351-ACT

FOXL2はフォークヘッド（forkhead）ファミリーの転写因子をコードしており、系譜特異的な遺伝子発現プログラムを制御することで、卵巣の発生および顆粒膜細胞のアイデンティティ維持に中心的な役割を果たします。FOXL2は、核内受容体シグナル伝達やクロマチン関連制御因子との相互作用を介して、ステロイド産生、卵胞形成、細胞周期のバランスを制御する転写ネットワークを調節します。FOXL2の活性は卵巣機能と細胞の分化状態の維持に寄与し、FOXL2依存的な転写制御の破綻は、生殖内分泌疾患や腫瘍に関連する遺伝子発現シグネチャーと関連づけられています。DNA結合性の制御因子として、FOXL2はプロモーター／エンハンサーへの結合占有、エピジェネティック状態、および状況依存的な転写出力に及ぼす影響の観点から、しばしば研究されています。

FOXL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。