Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXF1: sc-403521-ACT

FOXF1 (forkhead box F1) code un facteur de transcription de type « winged-helix » qui régule la différenciation mésenchymateuse et l’organogenèse, avec des rôles majeurs dans le développement pulmonaire et vasculaire. Dans le noyau, FOXF1 coordonne des programmes géniques contrôlant la migration cellulaire, le remodelage de la matrice extracellulaire et des réseaux transcriptionnels associés aux cellules musculaires lisses/aux péricytes, en intégrant des signaux développementaux tels que l’activité des voies Hedgehog et TGF-β. Une altération du dosage de FOXF1 ou une perturbation de sa régulation est associée à des troubles congénitaux pulmonaires et vasculaires, et son expression aberrante a été étudiée dans des contextes de remodelage tissulaire et de biologie du stroma associé au cancer. Ces caractéristiques font de FOXF1 un nœud utile pour disséquer les circuits transcriptionnels qui gouvernent les transitions d’état des cellules mésenchymateuses et les interactions épithélio-mésenchymateuses.

FOXF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.