Plásmido CRISPR de Activación (h) FOXC1: sc-403113-ACT

FOXC1 (forkhead box C1) es un factor de transcripción de tipo hélice alada (winged-helix) que regula programas génicos que controlan el patrón embrionario, el desarrollo de la cresta neural y del mesénquima periocular, así como la especificación vascular y linfática. Funciona como un regulador de unión al ADN específico de secuencia que integra señales del desarrollo, incluidas las redes transcripcionales asociadas a TGF-β/BMP y a Wnt, para influir en las decisiones de destino celular, la migración y la remodelación de la matriz extracelular. La desregulación de la expresión de FOXC1 o sus mutaciones se asocia estrechamente con trastornos de disgenesia del segmento anterior, como el espectro de Axenfeld–Rieger y el glaucoma congénito, y una actividad aberrante de FOXC1 se ha vinculado con una diferenciación alterada y fenotipos invasivos en múltiples contextos de cáncer. Como regulador transcripcional nodal, FOXC1 se utiliza ampliamente para estudiar el compromiso de linaje, programas similares a la transición epitelio–mesénquima y la circuitería de regulación génica en modelos de desarrollo y enfermedad.

FOXC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXC1 en células tumorales con expresión de FOXC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.