FOXC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403113-ACT

FOXC1（forkhead box C1）はウィングドヘリックス型の転写因子で、胚発生におけるパターニング、神経堤および眼周囲間葉の発生、ならびに血管・リンパ管の分化仕様を制御する遺伝子プログラムを調節します。配列特異的なDNA結合性の制御因子として、TGF-β/BMPやWnt関連の転写ネットワークを含む発生シグナル入力を統合し、細胞運命決定、遊走、細胞外マトリックスのリモデリングに影響を与えます。FOXC1の発現異常や変異は、Axenfeld–Riegerスペクトラムや先天性緑内障などの前眼部形成異常疾患と強く関連しており、FOXC1活性の異常は複数のがんの文脈で分化の変化や浸潤性表現型とも結び付けられています。転写制御の結節点となる調節因子として、FOXC1は発生および疾患モデルにおける系譜決定、上皮間葉転換（EMT）様プログラム、遺伝子制御回路の解析に広く用いられています。

FOXC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。