Flt-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400684

Descripción general

FLT4 codifica la tirosina quinasa receptora Flt-4 (VEGFR-3), un mediador principal de la señalización linfangiogénica aguas abajo de VEGFC y VEGFD. La activación dependiente del ligando desencadena la autofosforilación y activa las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCγ y otras relacionadas, que regulan la supervivencia y migración de las células endoteliales, así como el patrón de formación de los vasos linfáticos. La actividad de Flt-4 contribuye al desarrollo vascular y linfático y se estudia con frecuencia en el contexto de la linfangiogénesis asociada a tumores, la diseminación metastásica y la remodelación inflamatoria. La desregulación de la señalización de FLT4 también se ha vinculado a trastornos linfáticos hereditarios, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en la biología vascular y en modelos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Flt-4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FLT4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FLT4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FLT4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Flt-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FLT4 para la investigación de la señalización de Flt-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FLT4 críticos para la función de Flt-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FLT4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Flt-4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Flt-4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FLT4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Flt-4 (h) y el plásmido HDR Flt-4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FLT4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FLT4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.