Plasmide Double Nickase (h) Flotillin-1: sc-400736-NIC

FLOT1 code la flotilline-1, une protéine d’échafaudage associée aux radeaux lipidiques, enrichie à la membrane plasmique et dans les compartiments endosomaux, où elle contribue à organiser des microdomaines membranaires et à coordonner le trafic vésiculaire. La flotilline-1 participe à l’endocytose indépendante de la clathrine, à l’internalisation des récepteurs et à la dynamique du cytosquelette, influençant des voies de transduction du signal liées à la signalisation des facteurs de croissance et des récepteurs immunitaires. Par ses rôles dans l’organisation membranaire et le tri endosomal, FLOT1 peut moduler la migration cellulaire, l’adhérence et les réponses au stress. Une expression ou une localisation dérégulée de la flotilline-1 a été associée à des réseaux de signalisation altérés et à des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer ainsi que pour des processus neurodégénératifs et inflammatoires, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique dans les études de signalisation et de trafic intracellulaire.

Flotillin-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FLOT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FLOT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FLOT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FLOT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.