Plásmido CRISPR de Activación (h) FKBPL: sc-410504-ACT

FKBPL (proteína similar a la proteína de unión a FK506) codifica un cochaperón relacionado con las inmunofilinas que se asocia con complejos de HSP90 y contribuye a la proteostasis y a la señalización de receptores de esteroides. Se ha vinculado con la regulación de la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés celular y la modulación de la estabilidad proteica en vías que influyen en la proliferación y la diferenciación. En células humanas, la actividad de FKBPL se ha estudiado en contextos que implican señalización angiogénica y señales inflamatorias, con conexiones descritas con la biología tumoral y la remodelación vascular. Se han observado alteraciones en la expresión de FKBPL en diversos modelos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de adaptación de la señalización y regulación del microambiente.

FKBPL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FKBPL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FKBPL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FKBPL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FKBPL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FKBPL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FKBPL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FKBPL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FKBPL en células tumorales con expresión de FKBPL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.