Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Filensin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419323
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Filensin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Filensin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Filensin Anticuerpo (IB38): sc-69689
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Filensin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419323 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Bfsp1 codifica la filensina, una proteína de filamentos intermedios enriquecida en las células de las fibras del cristalino, que heteropolimeriza con la fakina (BFSP2) para formar filamentos perlados. Esta red del citoesqueleto sostiene la arquitectura de las fibras del cristalino, contribuye a la formación de la zona libre de orgánulos durante la diferenciación terminal y ayuda a mantener la transparencia refractiva mediante la estabilización de las interacciones entre la membrana y el citoesqueleto. La alteración del ensamblaje de los filamentos perlados perturba la biomecánica del cristalino y la proteostasis, vinculando los defectos de filamentos asociados a BFSP1 con fenotipos relacionados con cataratas y con vías más amplias que controlan la organización del citoesqueleto, la agregación proteica y las respuestas celulares al estrés.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Filensin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Bfsp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Bfsp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Bfsp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Filensin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Bfsp1 para la investigación de la señalización de Filensin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Bfsp1 críticos para la función de Filensin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Bfsp1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Filensin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Filensin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Bfsp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Filensin (m) y el plásmido HDR Filensin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Bfsp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Bfsp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.