Filamin 3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402897-ACT

FLNB kodiert Filamin 3, ein aktinbindendes Gerüstprotein, das F‑Aktin quervernetzt und das Zytoskelett mit Membranrezeptoren sowie Signalkomplexen koppelt. Filamin 3 trägt zur Koordination von Zellform, Adhäsion und Mechanotransduktion bei, indem es Signalwege organisiert, die mit Integrinbindung, der Dynamik fokaler Adhäsionen und der Signalübertragung durch Rho‑Familien‑GTPasen verknüpft sind. Über diese Funktionen beeinflusst es den Umbau des Zytoskeletts, die Zellmigration und die Gewebearchitektur während Entwicklung und Homöostase. Eine fehlregulierte FLNB‑Aktivität oder eine veränderte Organisation des zytoskelettalen Netzwerks wurde mit Entwicklungsstörungen und krankheitsrelevanten Veränderungen der zellulären Mechanik in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung insbesondere in der muskuloskelettalen Forschung und der Krebsbiologie unterstützt.

Filamin 3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FLNB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Filamin 3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FLNB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FLNB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Filamin 3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FLNB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Filamin 3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Filamin 3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FLNB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.