Plasmide CRISPR/Cas9 KO Filamin 2 (h): sc-402358

Présentation

FLNC code la filamine 2, une grande protéine d’échafaudage se liant à l’actine, qui réticule la F‑actine et couple le cytosquelette aux récepteurs membranaires et aux complexes de signalisation. La filamine 2 coordonne la mécanotransduction, la forme cellulaire et la dynamique d’adhésion en organisant les réseaux d’actine et en interagissant avec les intégrines et la machinerie d’adhésion focale associée. Dans le muscle strié, FLNC soutient l’intégrité sarcomérique et myofibrillaire et contribue à la transmission de la force ainsi qu’aux réponses au stress. Des altérations génétiques de FLNC sont associées à des cardiomyopathies et à des myopathies myofibrillaires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage du cytosquelette et des mécanismes des maladies musculaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Filamin 2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FLNC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FLNC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FLNC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Filamin 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FLNC pour l'étude de la signalisation de Filamin 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FLNC essentiels à la fonction de Filamin 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FLNC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Filamin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Filamin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FLNC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Filamin 2 plasmide HDR (h) et le Filamin 2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FLNC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FLNC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.