Filamin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402358-ACT

O FLNC humano codifica a filamina 2, um arcabouço citosquelético de ligação à actina que interliga F-actina e acopla o citoesqueleto cortical a proteínas de membrana, coordenando a forma celular, a adesão e a mecanotransdução. A filamina 2 participa da adesão focal e da sinalização associada a integrinas, influenciando o remodelamento do citoesqueleto, a migração e a transmissão de força no músculo e em outros tecidos submetidos a estresse mecânico. Redes dependentes de FLNC fazem interface com vias que controlam a integridade do sarcômero e respostas ao estresse, conectando a organização do citoesqueleto à homeostase celular. A disrupção genética ou a expressão desregulada de FLNC está associada a cardiomiopatia e miopatias esqueléticas, reforçando sua relevância para estudos de biologia muscular e mecanismos de doença.

Filamin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLNC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Filamin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLNC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLNC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Filamin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLNC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Filamin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Filamin 2 em células tumorais com expressão de FLNC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.