Plasmide Double Nickase (m) Filamin 1: sc-431396-NIC

Le gène murin *Flna* code la filamine 1, une grande protéine d’échafaudage se liant à l’actine, qui réticule les réseaux de F-actine et coordonne la signalisation des récepteurs membranaires avec le remodelage du cytosquelette. La filamine 1 régule la forme cellulaire, l’adhésion et la mécanotransduction en organisant des complexes impliquant les intégrines, les petites GTPases et divers récepteurs transmembranaires, influençant ainsi la migration et la morphogenèse tissulaire. Dans de nombreux types cellulaires, la dynamique du cytosquelette dépendante de FLNA croise des voies contrôlant le renouvellement des adhérences focales et la transmission des forces, faisant de *Flna* un déterminant clé des programmes de polarité et de motilité. Une perturbation ou une régulation altérée de la filamine 1 a été associée à des anomalies du développement et à des phénotypes pertinents pour la maladie, liés à une migration cellulaire aberrante ainsi qu’à des défauts vasculaires ou du tissu conjonctif, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans des études centrées sur le cytosquelette.

Filamin 1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Flna dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Flna. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Flna. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Flna.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.