Plasmide CRISPR d'Activation (m) Filamin 1: sc-431396-ACT

Le gène murin *Flna* code la filamine 1, une protéine d’échafaudage de grande masse moléculaire liant l’actine, qui réticule la F‑actine et couple le cytosquelette aux récepteurs transmembranaires afin de réguler la forme cellulaire, l’adhésion et la mécanoperception. La filamine 1 organise des plateformes de signalisation impliquées dans l’adhésion dépendante des intégrines, le renouvellement des adhérences focales et le remodelage du cytosquelette piloté par les GTPases de la famille Rho, influençant la migration et la morphogenèse tissulaire. Par ses interactions avec des protéines membranaires et de signalisation, elle module des processus tels que l’endocytose, la stabilité membranaire et des programmes transcriptionnels sensibles aux forces. Un dérèglement de la fonction de FLNA a été associé à des phénotypes développementaux et neurovasculaires et fait l’objet de nombreuses études pour ses rôles dans la motilité cellulaire, l’intégrité des barrières et les réseaux de signalisation du cytosquelette.

Filamin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Flna sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Filamin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Flna dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Flna, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Filamin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Flna natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Filamin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Filamin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Flna silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.