FIG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404404

Übersicht

FIG4 kodiert eine Phosphoinositid-5-Phosphatase, die den Umsatz von Phosphatidylinositol-3,5-bisphosphat und verwandten Lipiden an endolysosomalen Membranen reguliert. Durch seine Beteiligung an regulatorischen PIKfyve–VAC14–FIG4-Komplexen beeinflusst FIG4 den Transport von Endosomen zu Lysosomen, die Autophagie, das Membranrecycling sowie die Aufrechterhaltung der lysosomalen Homöostase. Eine Störung der FIG4-Aktivität beeinträchtigt die endolysosomale Dynamik und zelluläre Stressantworten – Prozesse, die für die Erhaltung von Neuronen und die Myelinintegrität zentral sind. Humangenetische Studien bringen eine FIG4-Fehlfunktion mit neurodegenerativen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung und unterstreichen damit seine Bedeutung für Membrantransportwege, die für die Biologie des Nervensystems relevant sind.

Das FIG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FIG4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FIG4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FIG4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FIG4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FIG4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FIG4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FIG4-Exone abzielen, die für die FIG4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FIG4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FIG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FIG4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FIG4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FIG4 HDR-Plasmid (h) und FIG4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FIG4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FIG4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.