Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420294

Übersicht

Fbln1 kodiert Fibulin-1, ein sezerniertes Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das mit Basalmembranen und elastischen Fasern assoziiert und dadurch den Aufbau der Matrix, die Gewebeelastizität sowie die Zell–Matrix-Signalübertragung reguliert. Fibulin-1 interagiert mit strukturellen und adhäsiven Komponenten wie Fibronectin, Lamininen und Proteoglykanen und beeinflusst so die Dynamik fokaler Adhäsionen, die Zellmigration und die Mechanotransduktion. In Mausmodellen wurden veränderte Fbln1-Expression oder eine veränderte Einlagerung in die Matrix mit Defekten in der Organisation von Gefäß- und Bindegewebe sowie mit Umbauprozessen in Verbindung gebracht, die für Fibrose und tumorassoziierte stromale Veränderungen relevant sind. Diese Funktionen machen Fibulin-1 zu einem nützlichen Ansatzpunkt, um die Homöostase der extrazellulären Matrix und die Kontrolle zellulärer Phänotypen durch das Mikromilieu zu untersuchen.

Das Fibulin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fbln1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fbln1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fbln1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fibulin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fbln1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fibulin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fbln1-Exone abzielen, die für die Fibulin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fbln1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fibulin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Fibulin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fbln1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fibulin-1 HDR-Plasmid (m) und Fibulin-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fbln1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fbln1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.