fibrillin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420296

Descripción general

El gen murino **Fbn1** codifica la fibrilina-1, una glicoproteína principal de la matriz extracelular que se ensambla en microfibrillas para proporcionar un andamiaje para las fibras elásticas y regular la biomecánica tisular. Las microfibrillas de fibrilina-1 coordinan la biodisponibilidad de factores de crecimiento, en particular al modular el secuestro del complejo latente de TGF-β y las salidas de señalización que influyen en la homeostasis vascular, esquelética y del tejido conectivo. A través de estas interacciones entre matriz y señalización, **Fbn1** afecta procesos como la organización de la matriz extracelular, la mecanotransducción y la morfogénesis del desarrollo. La alteración de la función de la fibrilina-1 se utiliza ampliamente para modelar microfibrilopatías y fenotipos del tejido conectivo relevantes para la remodelación cardiovascular y la integridad musculoesquelética en sistemas experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO fibrillin-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fbn1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fbn1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fbn1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína fibrillin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fbn1 para la investigación de la señalización de fibrillin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fbn1 críticos para la función de fibrillin-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fbn1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido fibrillin-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido fibrillin-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fbn1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR fibrillin-1 (m) y el plásmido HDR fibrillin-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fbn1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fbn1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.