Plasmide Double Nickase (h) FHOD1: sc-404286-NIC

FHOD1 (formin homology 2 domain containing 1) code une formine apparentée à Diaphanous qui favorise l’allongement et l’organisation des filaments d’actine, contribuant à l’assemblage des fibres de stress, à la polarité cellulaire et à la migration dépendante de l’adhérence. En tant qu’effecteur en aval de la signalisation des GTPases de la famille Rho, FHOD1 intègre des signaux issus des voies de remodelage du cytosquelette pour réguler la contractilité et la dynamique des protrusions membranaires. Une activité de FHOD1 altérée a été associée à des modifications de la motilité cellulaire et du comportement invasif, et la dérégulation de l’architecture de l’actine implique FHOD1 dans des études sur la progression tumorale, le remodelage cardiovasculaire et fibrotique, ainsi que des processus neurodéveloppementaux. Sa localisation et sa fonction au niveau de structures riches en actine en font un point d’entrée utile pour étudier la mécanotransduction et le couplage cytosquelette–noyau.

FHOD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FHOD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FHOD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FHOD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FHOD1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.