FHL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403541

Übersicht

FHL1 kodiert das Four-and-a-half-LIM-Domains-Protein 1 (FHL-1), ein ausschließlich LIM-Domänen enthaltendes Adapterprotein, das in quergestreifter Muskulatur angereichert ist und am Sarkomer und an den Costameren als Gerüstprotein Multiprotein-Komplexe organisiert. FHL-1 koordiniert die Organisation des Zytoskeletts, die Mechanotransduktion und transkriptionelle Outputs, indem es Strukturproteine mit Signalknoten koppelt, die an Muskel-differenzierung und -remodelling beteiligt sind. Eine veränderte FHL1-Funktion wird mit erblichen Myopathien und Kardiomyopathien in Verbindung gebracht, bei denen gestörte Protein-Protein-Interaktionen die Integrität des Sarkomers sowie Stressantwort-Signalwege beeinträchtigen können. Über die Muskelbiologie hinaus wurde FHL-1 als Modell verwendet, um die LIM-Domänen-vermittelte Assemblierung von Signalkomplexen und die kontextabhängige Regulation der Genexpression zu untersuchen.

Das FHL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FHL1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FHL1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FHL1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FHL-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FHL1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FHL-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FHL1-Exone abzielen, die für die FHL-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FHL1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FHL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FHL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FHL1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FHL-1 HDR-Plasmid (h) und FHL-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FHL1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FHL1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.