FGF-4 Double Nickase Plasmid (h): sc-403042-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FGF-4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FGF-4 Double-Nickase-Plasmid (h) und FGF-4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FGF4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FGF-4: sc-57126
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FGF-4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403042-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FGF-4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403042-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FGF4 kodiert den Fibroblasten‑Wachstumsfaktor 4 (FGF‑4), einen sezernierten, heparinbindenden Liganden, der hauptsächlich über Rezeptor‑Tyrosinkinasen der FGFR‑Familie signalisiert und so die embryonale Musterbildung, die Extremitätenentwicklung und die Gewebemorphogenese reguliert. Die Bindung von FGF‑4 aktiviert nachgeschaltete Signalwege wie RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT und PLCγ, die in responsiven Zelltypen Proliferation, Überleben, Migration und Differenzierung koordinieren. Eine fehlregulierte FGF4‑Signalgebung wurde mit abweichender Wachstumskontrolle und veränderten Entwicklungsprogrammen in Verbindung gebracht, was sie für Studien zur Aktivierung onkogener Signalwege, zum Verhalten von Stamm‑/Vorläuferzellen und zur Tumor‑Stroma‑Kommunikation relevant macht. Als Teil der übergeordneten FGF–FGFR‑Achse wird FGF‑4 häufig im Hinblick auf seine Effekte auf epithelo‑mesenchymale Dynamiken und die Signalgebung im Mikromilieu untersucht.
FGF-4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FGF4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FGF4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FGF4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FGF4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.