Plasmide CRISPR d'Activation (h) FGF-21: sc-401193-ACT

Le gène humain **FGF21** code le facteur de croissance des fibroblastes 21 (FGF-21), un membre de la famille des FGF de type endocrinien qui régule l’équilibre énergétique systémique et les réponses au stress nutritionnel. La signalisation de FGF-21 intègre les programmes métaboliques des hépatocytes, des adipocytes et du muscle, influençant l’homéostasie du glucose et des lipides via des voies médiées par les **FGFR** qui nécessitent le co‑récepteur **β‑Klotho**, avec une modulation en aval de **MAPK/ERK** et de réseaux transcriptionnels associés. Il est fortement induit par le jeûne, les états cétogènes et le stress cellulaire, coordonnant des réponses adaptatives telles que l’oxydation des acides gras, la cétogenèse et la sensibilité à l’insuline. Une expression dérégulée de **FGF21** a été associée à des troubles métaboliques, notamment l’obésité, le diabète de type 2, la stéatose hépatique non alcoolique, ainsi qu’à des phénotypes plus larges de risque cardiométabolique, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des voies de signalisation.

FGF-21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGF21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FGF-21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGF21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGF21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FGF-21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGF21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FGF-21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FGF-21 dans les cellules tumorales présentant une expression de FGF21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.