ferritin heavy chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418152

概要

FTH1はフェリチン重鎖をコードしており、Fe2+をFe3+へ酸化して細胞内で鉄を安全に貯蔵できるようにする、フェリチン複合体の触媒サブユニットです。不安定鉄（ラビル鉄）を緩衝し、鉄によって駆動される活性酸素種（ROS）の生成を抑えることで、FTH1はレドックス恒常性、ミトコンドリア機能、ならびに酸化損傷からの防御に寄与します。フェリチンの動態は、トランスフェリン受容体介在性エンドサイトーシスやフェロポルチン依存性の排出といった鉄の取り込み・輸送経路とも交差し、低酸素、炎症、代謝ストレスに対する細胞応答を形作ります。FTH1発現やフェリチン代謝の破綻は、鉄過剰、神経変性、感染に伴う炎症、腫瘍生物学といった、鉄の利用可能性が増殖や細胞死プログラムに影響する状況でしばしば研究されています。

ferritin heavy chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFTH1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FTH1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FTH1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ferritin heavy chainタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ferritin heavy chainシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FTH1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ferritin heavy chainの機能に不可欠なFTH1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FTH1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ferritin heavy chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびferritin heavy chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FTH1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ferritin heavy chain HDRプラスミド（h）および ferritin heavy chain HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFTH1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFTH1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。