Plasmide CRISPR/Cas9 KO FDX1L (m): sc-426948

Présentation

Fdx1l code la ferredoxine 1‑like (FDX1L), une protéine mitochondriale de la famille des ferredoxines impliquée dans des réactions de transfert d’électrons qui soutiennent l’équilibre rédox mitochondrial et le métabolisme oxydatif. En acheminant des électrons vers des enzymes mitochondriales, FDX1L est susceptible d’influencer des voies liées au maintien des clusters fer‑soufre, à des réactions stéroïdogènes ou associées à l’hème, ainsi qu’à l’homéostasie mitochondriale au sens large. La perturbation de processus mitochondriaux dépendants des ferredoxines peut modifier la gestion des espèces réactives de l’oxygène, la flexibilité métabolique et les réponses au stress, ce qui fait de Fdx1l une cible pertinente pour l’étude des dysfonctions mitochondriales. Dans les systèmes murins, Fdx1l constitue un point d’entrée exploitable pour analyser comment le transfert d’électrons mitochondrial s’articule avec le métabolisme cellulaire et avec des phénotypes pertinents pour la maladie induits par une activité mitochondriale altérée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FDX1L (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fdx1l dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fdx1l, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fdx1l à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FDX1L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fdx1l pour l'étude de la signalisation de FDX1L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fdx1l essentiels à la fonction de FDX1L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fdx1l pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FDX1L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FDX1L plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fdx1l. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FDX1L plasmide HDR (m) et le FDX1L (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fdx1l pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fdx1l définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.